使用真核细胞生产的生物制品理论上可能存在潜在的病毒污染，为保证生物制品质量，控制生物制品安全风险，法规部门对于生物制品安全性的要求日益严格，生物制品生产对于病毒灭活/清除验证的需求日益增加。

常用的病毒灭活/清除工艺包括S/D灭活法、低pH灭活法、纳米膜过滤和层析等方法，其中层析法具有高效稳健的病毒清除效果，是下游纯化过程中重要的病毒清除手段。

(资料图片仅供参考)

注：不同病毒在不同模型下具有不同的清除效果，此数据为基于文献1，2总结，为常见病毒清除量，具有一定代表性，可为参考。

病毒清除验证需要使用缩小模型。在层析工艺的缩小模型中，下表所示的工艺参数须与生产环境保持一致，其他工艺参数则需线性缩小，以保证缩小模型对商业化生产环境的代表性。

在病毒清除验证试验中，为证明特定工艺的最低病毒去除量，通常选择工艺最差条件进行试验。即在进行病毒清除验证试验的相关工艺中，选择那些与理想实验条件相比，会造成工艺或产品最大潜在失败风险的工艺条件。

在亲和层析中（Affinity chromatography），目标分子与亲和介质特异性结合，具有很高的专一性。病毒分子并不具备这种特异性，不会与层析介质结合。因此，亲和层析具有很高的病毒清除率。

但在另一方面，目标分子本身特性也对清除效果有很大影响，由于不同目标分子本身存在着较大的特异性差异，目标分子与病毒之间存在相互作用和共溶现象，形成病毒-mAb结合体而被亲和基团捕捉，导致病毒清除效率的下降。

也正是因为上述原因，在层析平衡液中添加可干扰病毒与蛋白相互作用的添加剂可帮助提高病毒清除效果。

阴离子层析（AEX，AnionExchangeChromatography）清除病毒主要依赖病毒与层析介质之间的静电吸附作用。在上述过程中，病毒的特殊结构及粒径大小会在一定程度上影响其与层析介质的相互作用强度。阴离子层析主要采用流穿模型，根据病毒、目标分子的等电点差异，调整样品pH，使目标分子流穿的同时，病毒分子与层析介质结合，实现病毒清除。

流穿阴离子模型FT-AEX（flow-throughAEX）的常用pH为7.0-8.5，电导＜14mS/cm。FT-AEX对包膜病毒及非包膜病毒具有稳健的病毒清除能力。但值得注意的是，X-MuLv在pH为5.0，仍具有较强的清除效果，其主要原因是X-MuLv病毒表面蛋白能够形成恒定负电荷蛋白斑块，与AEX介质结合而被去除。

阳离子层析（CEX，CationExchangeChromatography）多采用结合洗脱模型，带正电荷的杂质、病毒、目标分子与层析介质结合，带负电荷的流穿。根据不同分子pI不同，CEX可基于静电相互作用的强弱对样品进行梯度洗脱与分离。CEX对X-MuLv、Reo-3及PRV均有良好的清除效果，但对MVM的清除效果较差。

MVM与X-MuLv等电点相近，在pH为5.0的CEX模型中，虽然MVM（pI6.2）较X-MuLV（pI5.8）携带更多正电荷，但由于其表面结构的影响，其与CEX介质的结合强度却远低于X-MuLv，不能得到有效的清除。

参考文献：

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